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宿主细胞依赖多种免疫应答机制来对抗病毒感染。其中,针对核酸分子的免疫识别和操作,是极为核心的抗病毒免疫策略,其广泛存在于从细菌到哺乳动物等几乎所有宿主系统中(图-1)。相较于哺乳动物细胞稍显复杂的信号转导和调控,细菌往往更为简单高效,其编码的多种抗病毒免疫系统可直接对核酸分子进行切割或修饰(图-1)。这种特点也使得细菌免疫系统被广泛用于多种生物学工具的开发(如R-M和CRISPR-Cas等),极大促进了整个生命医学领域的发展。

图-1. 针对核酸分子的免疫识别和操作

近期,Feng Zhang和Eugene Koonin团队鉴定出一种拥有全新核酸修饰活性的细菌免疫系统:RADAR(phage restriction by an adenosine deaminase acting on RNA)。RADAR是目前已知唯一可通过催化RNA的A-to-I(adenosine-to-inosine)脱氨来执行抗病毒功能的细菌防御系统,其包含两种核心组分:RdrA(ATPase酶活性)和RdrB(腺苷脱氨酶活性),这两种酶活性对于RADAR执行功能都是必须的。病毒感染后,RADAR被激活并广泛催化宿主及病毒的转录组RNA脱氨,造成被感染细胞的死亡,进而阻断病毒传播。RADAR在抗病毒免疫和RNA修饰方面展现出多种新颖特点,且有潜力被开发为新型的生物学工具,因此受到领域内的广泛关注。目前关于RADAR的研究仅是冰山一角,还有很多核心科学问题亟待回答。

2023年2月9日,科院生物物理研究所高璞团队在《Cell》在线发表题为 "Molecular basis of RADAR anti-phage supramolecular assemblies" 的文章,发现了RADAR不同组分间的互作关系,揭示了其通过形成新型超分子复合体来实现RNA装载、运输和脱氨修饰的精妙偶联机制,拓展了我们对细菌-病毒博弈复杂性的理解,并为开发基于RADAR的多种生物学工具提供了思路。

此前已知能催化RNA A-to-I脱氨的酶只有ADAR和ADAT两类,其从进化上均属于CDA超家族。而RADAR中的脱氨酶组分RdrB,在进化上却属于差别巨大的ADA超家族。RdrB的大小近3倍于经典ADA成员,除催化结构域外还存在多个作用未知的插入区域。为更好的理解RdrB的功能,研究人员解析了RdrB的高分辨率冷冻电镜结构,意外发现12个RdrB按照特定方式组装成了一个闭合的笼状结构(~1.1MDa)。该笼状结构拥有典型的正六面体排列,这在ADA和CDA超家族中都从未被报道过。这种精巧的组装,依赖于催化结构域和多个插入区域的协同作用。进一步的功能实验表明,RdrB亚基间的互作对抗病毒功能至关重要。有趣的是,所有RdrB的催化口袋都朝向笼子的外侧,暗示其随时准备识别和催化临近的底物。

通过结构分析和生化验证,研究人员发现RdrB并不能有效结合含Stem-Loop元件的底物RNA。那么,对RADAR功能同样关键的另一个组分RdrA,是否会协助RdrB对RNA的修饰呢?研究人员解析了RdrA的结构,意外发现RdrA同时组装成单层的7聚体环(~0.75MDa)和由两个7聚体环叠合而成的双层14聚体环(~1.5MDa)。每个7聚体环都呈现为顶部结构稳定、而底部结构动态多变的特点,提示这两个区域潜在的不同功能。更重要的是,RdrA环中心形成了一个独特的通道,其直径和表面电荷均符合底物RNA的特点,提示该通道可能用于底物运输。后续生化实验表明,RdrA环与Stem-Loop RNA存在特异性结合,且RNA的存在可显著促进RdrA的ATPase酶活性。接下来,研究人员解析了RdrA与Stem-Loop RNA复合物的结构,成功捕捉到RNA装载到RdrA环的动态底部的构象。同时,研究人员还发现RNA的装载与ATP的结合存在联动关系,提示RdrA可通过控制ATP水解来发挥其底物的装载和运输功能。

基于上述结果,研究人员基本确定了RdrA负责底物装载和运输,而RdrB负责底物脱氨的功能分工,但却仍不清楚两者如何实现酶活偶联。接下来,研究人员首先通过生化实验确定了RdrA和RdrB之间存在直接互作,并进一步通过结构解析阐明了两者互作的分子细节。令人惊奇的是,RdrA的7聚体环通过其结构稳定的顶部与RdrB笼进行对接,且RdrA环的底物运输通道恰好与RdrB的活性中心完美对齐,从而实现了底物装载、运输和修饰的巧妙偶联。结构分析还表明,1-12个RdrA 7聚体环可以通过动态的方式与RdrB笼对接。完整组装的RADAR复合体包含96个蛋白亚基,颗粒直径40nm,仅蛋白部分的分子量就达10.1MDa。

除了RNA类底物,研究人员还发现RdrB及RdrA-RdrB复合物也可以催化多种小分子代谢类底物(ATP/dATP/ADP/dADP/AMP/dAMP/ adenosine)的脱氨反应。近期有工作表明,细胞内的小分子类inosine大量聚集,也会对细胞产生毒性并使其生长停滞。因此,RADAR对RNA类底物和小分子类底物的脱氨修饰,可能共同推动了其有效的抗病毒功能。

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